Рухомая фаза эквівалентная вадкай фазе крыві, і ёсць розныя рэчы, на якія варта звярнуць увагу падчас выкарыстання. Сярод іх ёсць некаторыя «падводныя камяні», на якія варта звярнуць увагу.
01. Вымерайце pH рухомай фазы пасля дадання арганічнага растваральніка
Калі вы вымяраеце pH з дапамогай арганічнай дабаўкі, атрыманы pH будзе адрознівацца ад таго, які быў да дадання арганічнага растваральніка. Аднак самае галоўнае - быць паслядоўным. Калі вы заўсёды вымяраеце pH пасля дадання арганічнага растваральніка, пераканайцеся, што вы ўказваеце свае крокі ў метадзе, які вы выкарыстоўваеце, каб іншыя прытрымліваліся таго ж метаду. Гэты метад не з'яўляецца на 100% дакладным, але, па меншай меры, ён захавае паслядоўнасць метаду. Гэта можа быць больш важным, чым атрыманне дакладнага значэння pH.
02. Буфер не выкарыстоўваецца
Мэта буфера - кантраляваць pH і прадухіляць яго змяненне. Многія іншыя метады змяняюць pH рухомай фазы, што можа выклікаць зрухі ў часе ўтрымання, форме піку і пікавай рэакцыі.
Мурашыная кіслата, TFA і г.д. не з'яўляюцца буферамі
03. Не выкарыстоўваецца буфер у нармальным дыяпазоне pH
Кожны буфер мае шырыню дыяпазону рН у 2 адзінкі, у межах якога ён забяспечвае найлепшую стабільнасць рН. Буферы за межамі гэтага акна не будуць забяспечваць эфектыўную супраціўляльнасць зменам pH. Альбо выкарыстоўвайце буфер у правільным дыяпазоне, альбо выбірайце буфер, які ахоплівае патрэбны вам дыяпазон pH.
04. Дадайце буфер у арганічны раствор
Змешванне буфернага раствора з арганічнай фазай, хутчэй за ўсё, прывядзе да выпадзення буфера ў асадак. У многіх выпадках, нават калі ападкі адбыліся, іх усё роўна цяжка выявіць. Не забывайце заўсёды дадаваць арганічны раствор у водную фазу, што можа значна паменшыць верагоднасць выпадзення буфернага ападку.
05. Змяшайце градыент канцэнтрацыі ад 0% помпай
Даступныя сёння помпы могуць эфектыўна змешваць рухомыя фазы і ўбудоўваць дэгазацыю, але не кожны, хто выкарыстоўвае ваш метад, будзе мець высакаякасны помпа. Змяшайце A і B у адзін раствор і запусціце яго на 100% убудаваны.
Напрыклад, 950 мл арганічнай зыходнай сумесі можна прыгатаваць шляхам змешвання з 50 мл вады. Перавага гэтага заключаецца ў тым, што ён можа паменшыць зменлівасць паміж ВЭЖХ і паменшыць верагоднасць узнікнення бурбалак і ападкаў у сістэме. Варта адзначыць, што суадносіны сумесі для помпы складае 95:5, што не азначае, што час утрымання папярэдняй сумесі ў бутэльцы таксама складае 95:5.
06. Для змены буфера не выкарыстоўваецца належная мадыфікаваная кіслата (аснова).
Выкарыстоўвайце толькі кіслату або аснову, якія ўтвараюць буферную соль, якую вы выкарыстоўваеце. Напрыклад, натрый-фасфатны буфер трэба рыхтаваць толькі з фосфарнай кіслаты або гідраксіду натрыю.
07. Не паказваецца ўся інфармацыя пра буфер у метадзе, напрыклад, даданне 5 гнатрыю фасфату на 1000 мл вады.
Тып буфера вызначае дыяпазон pH, які можна буферызаваць. Неабходная канцэнтрацыя вызначае трываласць буфера. 5 грам або бязводнага фасфату натрыю і 5 грам моногидрата фасфату натрыю маюць розную трываласць буфера.
08. Даданне арганічных растваральнікаў перад праверкай
Калі ў папярэднім метадзе выкарыстоўваўся буферны раствор для базавай лініі B, а ў вашым метадзе выкарыстоўваецца арганічны раствор для базавай лініі B, можна спадзявацца, што буфер асядае ў трубках помпы і галоўцы помпы.
09. Падніміце бутэльку і выліце апошнюю кроплю
Ёсць вялікая верагоднасць таго, што ў вас не хопіць рухомай фазы, каб завяршыць увесь запуск, і ваш узор будзе дыміцца. Акрамя магчымасці перагарання помпавай сістэмы і калонкі, рухомая фаза цалкам выпарыцца і рухомая фаза ў верхняй частцы бутэлькі зменіцца.
10. Выкарыстоўвайце ультрагукавую дэгазацыю рухомай фазы
Самае важнае - пераканацца, што ўсе буферныя солі раствораны, але гэта горшы спосаб дэгазацыі, які хутка награвае рухомую фазу, у выніку чаго арганічныя кампаненты выпараюцца. Каб пазбегнуць непатрэбных праблем пазней, выдаткуйце пяць хвілін на вакуумную фільтрацыю мабільнай фазы.
Час публікацыі: 27 жніўня 2024 г