Прынцыпы і метады колькаснага аналізу метадам вадкаснай храматаграфіі

Механізм падзелу вадкаснай храматаграфіі заснаваны на розніцы ў сродстве кампанентаў у сумесі да дзвюх фаз.

У залежнасці ад розных стацыянарных фаз вадкасная храматаграфія дзеліцца на вадкасна-цвёрда-цвёрда-цвёрда-цвёрда-цвёрда-цвёрда-цвёрда-фазавую храматаграфію, вадкасна-вадкасную храматаграфію і храматаграфію са злучанай фазай.Найбольш шырока выкарыстоўваюцца вадкасна-цвёрдая храматаграфія з сілікагелем у якасці напаўняльніка і храматаграфія звязанай фазы з мікракремнеземам у якасці матрыцы.

Па форме нерухомай фазы вадкасную храматаграфію можна падзяліць на калонкавую храматаграфію, папяровую храматаграфію і тонкаслаёвую храматаграфію.У адпаведнасці з адсарбцыйнай здольнасцю яе можна падзяліць на адсарбцыйную храматаграфію, размеркавальную храматаграфію, іонаабменную храматаграфію і гельпранікальную храматаграфію.

У апошнія гады да сістэмы вадкаснай калоннай храматаграфіі была дададзена сістэма патоку вадкасці пад высокім ціскам, каб рухомая фаза хутка цякла пад высокім ціскам, каб палепшыць эфект падзелу, таму высокаэфектыўная (таксама вядомая як вадкасная храматаграфія высокага ціску) з'явілася.

ЧАСТКА
01 Прынцып колькаснага аналізу вадкаснай храматаграфіі

Для колькаснага вызначэння на аснове якасных у якасці стандартаў патрабуюцца чыстыя рэчывы;

Колькаснае вызначэнне вадкаснай храматаграфіі з'яўляецца адносна колькасным метадам: гэта значыць, колькасць аналіту ў сумесі ацэньваецца з вядомай колькасці чыстага стандартнага ўзору

ЧАСТКА
02 Аснова колькаснага вызначэння метадам вадкаснай храматаграфіі

Колькасць вымяранага кампанента (W) прапарцыйная значэнню адказу (A) (вышыня піка або плошча піка), W=f×A.

Колькасны папраўчы каэфіцыент (f): гэта канстанта прапарцыянальнасці формулы колькаснага разліку, а яе фізічны сэнс - колькасць вымяранага кампанента, прадстаўленага адзінкавым значэннем водгуку (плошча піку).

Колькасны папраўчы каэфіцыент можна атрымаць з вядомай колькасці стандартнага ўзору і яго значэння адказу.

Вымерайце значэнне адказу невядомага кампанента, а колькасць кампанента можна атрымаць з дапамогай колькаснага папраўчага каэфіцыента.

ЧАСТКА
03 Агульныя тэрміны ў колькасным аналізе

Проба (проба): раствор, які змяшчае аналіт для храматаграфічнага аналізу.Падзяляюцца на стандартныя і невядомыя ўзоры.

Стандарт: чысты прадукт з вядомай канцэнтрацыяй.Невядомы ўзор (невядомы): Сумесь, канцэнтрацыя якой павінна быць праверана.

Вага ўзору: першапачатковае ўзважванне ўзору, які падлягае тэсціраванню.

Развядзенне: Каэфіцыент развядзення невядомага ўзору.

Кампанент : храматаграфічны пік, які падлягае колькаснаму аналізу, гэта значыць аналіт, змест якога невядомы.

Колькасць кампанента (колькасць): змест (або канцэнтрацыя) рэчыва, якое падлягае выпрабаванню.

Цэласць : вылічальны працэс вымярэння плошчы піку храматаграфічнага піка камп'ютэрам.

Калібравальная крывая: лінейная крывая залежнасці ўтрымання кампанента ад значэння адказу, усталяваная з вядомай колькасці стандартнага рэчыва, якая выкарыстоўваецца для вызначэння невядомага ўтрымання аналіту.

ЧАСТКА
04 Колькасны аналіз вадкаснай храматаграфіі

1. Выберыце храматаграфічны метад, прыдатны для колькаснага аналізу:

l Пацвердзіце пік выяўленага кампанента і дасягніце раздзялення (R), большага за 1,5

l Вызначыць кансістэнцыю (чысціню) храматаграфічных пікаў доследных кампанентаў

l Вызначыць мяжу выяўлення і мяжу колькаснага вызначэння метаду;адчувальнасць і лінейны дыяпазон

2. Пабудуйце калібравальную крывую са стандартнымі ўзорамі розных канцэнтрацый

3. Праверка дакладнасці і дакладнасці колькасных метадаў

4. Выкарыстоўвайце адпаведнае праграмнае забеспячэнне для кіравання храматаграфіяй, каб ажыццявіць збор проб, апрацоўку даных і справаздачу аб выніках

ЧАСТКА
05 Ідэнтыфікацыя колькасных пікаў (якасных)

Якасна ідэнтыфікуйце кожны храматаграфічны пік, які падлягае колькаснай ацэнцы

Спачатку выкарыстоўвайце стандартны ўзор для вызначэння часу ўтрымання (Rt) храматаграфічнага піка, які падлягае колькаснай ацэнцы.Параўноўваючы час утрымання, знайдзіце кампанент, які адпавядае кожнаму храматаграфічнаму піку ў невядомым узоры.Храматаграфічны якасны метад заключаецца ў параўнанні часу ўтрымання са стандартнай пробай.Крытэрый Недастатковыдадатковае пацверджанне (якаснае)

1. Стандартны метад складання

2. Адначасова выкарыстоўвайце іншыя метады: іншыя храматаграфічныя метады (змяніце механізм, напрыклад: выкарыстанне розных храматаграфічных калонак), іншыя дэтэктары (PDA: параўнанне спектраў, пошук у бібліятэцы спектраў; MS: аналіз мас-спектра, пошук у бібліятэцы спектраў)

3. Іншыя прылады і метады

ЧАСТКА
06 Пацверджанне колькаснай кансістэнцыі піка

Пацвердзіце кансістэнцыю храматаграфічнага піку (чысціня)

Пераканайцеся, што пад кожным храматаграфічным пікам знаходзіцца толькі адзін вымераны кампанент

Праверце наяўнасць перашкод ад рэчываў, якія вылучаюцца сумесна (прымешкі)

Метады пацверджання кансістэнцыі храматаграфічнага піку (чысціня)

Параўнанне спектраграм з фотадыёднымі матрычнымі дэтэктарамі (PDA).

Пікавая ідэнтыфікацыя чысціні

2996 Тэорыя вугла чысціні

Колькасныя метады, якія звычайна выкарыстоўваюцца ў ЧАСТКІ 07

Метад стандартнай крывой, падзелены на знешні стандартны метад і ўнутраны стандартны метад:

1. Знешні стандартны метад: найбольш выкарыстоўваецца ў вадкаснай храматаграфіі

Была падрыхтавана серыя стандартных узораў з вядомымі канцэнтрацыямі з выкарыстаннем чыстых узораў злучэнняў, якія падлягаюць тэсціраванню ў якасці стандартных узораў.ўводзяць у калонку да значэння адказу (плошча піку).
У пэўным дыяпазоне існуе добрая лінейная залежнасць паміж канцэнтрацыяй стандартнага ўзору і значэннем адказу, а менавіта W= f×A, і складаецца стандартная крывая.

Пры такіх жа эксперыментальных умовах увядзіце невядомы ўзор, каб атрымаць значэнне водгуку кампанента, які трэба вымераць.У адпаведнасці з вядомым каэфіцыентам f можна атрымаць канцэнтрацыю кампанента, які трэба вымераць.

Перавагі вонкавага стандартнага метаду:простая аперацыя і разлік, гэта звычайна выкарыстоўваецца колькасны метад;няма неабходнасці выяўляць і вымываць кожны кампанент;неабходны стандартны ўзор;умовы вымярэння стандартнага ўзору і невядомага ўзору павінны адпавядаць;аб'ём ін'екцыі павінен быць дакладным.

Недахопы метаду вонкавага стандарту:Эксперыментальныя ўмовы павінны быць высокімі, напрыклад, адчувальнасць дэтэктара, хуткасць патоку і склад рухомай фазы нельга змяніць;аб'ём кожнай ін'екцыі павінен мець добрую паўтаральнасць.

2. Метад унутранага стандарту: дакладны, але клапотны, часцей за ўсё выкарыстоўваецца ў стандартных метадах

Вядомая колькасць унутранага стандарту дадаецца да стандарту, каб атрымаць змешаны стандарт, і рыхтуецца серыя рабочых стандартаў вядомай канцэнтрацыі.Малярнае стаўленне стандарту да ўнутранага стандарту ў змешаным стандарце застаецца нязменным.Увядзіце ў храматаграфічную калонку і прыміце (плошча піка стандартнага ўзору/плошча піка ўнутранага стандартнага ўзору) у якасці значэння адказу.У адпаведнасці з лінейнай залежнасцю паміж значэннем адказу і канцэнтрацыяй працоўнага стандарту, а менавіта W= f×A, будуецца стандартная крывая.

Вядомая колькасць унутранага стандарту дадаецца да невядомага ўзору і ўводзіцца ў калонку для атрымання значэння адказу кампанента, які трэба вымераць.У адпаведнасці з вядомым каэфіцыентам f можна атрымаць канцэнтрацыю кампанента, які трэба вымераць.

Характарыстыкі метаду ўнутранага стандарту:У ходзе аперацыі ўзор і ўнутраны стандарт змешваюцца і ўпырскваюцца ў храматаграфічную калонку, таму, пакуль стаўленне колькасці вымяранага кампанента да ўнутранага стандарту ў змешаным растворы пастаяннае, змяненне аб'ёму ўзору не паўплывае на колькасныя вынікі..Метад унутранага стандарту кампенсуе ўплыў аб'ёму ўзору і нават рухомай фазы і дэтэктара, таму ён больш дакладны, чым метад знешняга стандарту.

ЧАСТКА
08 Фактары, якія ўплываюць на вынікі колькаснага аналізу

Нізкая дакладнасць можа быць выклікана:

Няправільная інтэграцыя плошчы піку, раскладанне ўзору або прымешкі, уведзеныя падчас падрыхтоўкі ўзору, флакон з узорам не запячатаны, выпарванне ўзору або растваральніка, няправільная падрыхтоўка ўзору, праблемы з увядзеннем узору, няправільная падрыхтоўка ўнутранага стандарту

Магчымыя прычыны нізкай дакладнасці:

Няправільная пікавая інтэграцыя, праблемы з ін'екцыяй або інжэктарам, раскладанне ўзору або прымешкі, унесеныя падчас падрыхтоўкі ўзору, храматаграфічныя праблемы, пагаршэнне рэакцыі дэтэктара